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新聞詳情
紫外、紫外分光光度計、紫外可見(jiàn)分光光度計、UV百度百科
日期：2024-07-27 00:42
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摘要：
分光光度計
分光光度計，又稱(chēng)光譜儀(spectrometer)，是將成分復雜的光，分解為光譜線(xiàn)的科學(xué)儀器。測量范圍一般包括波長(cháng)范圍為400~760 nm的可見(jiàn)光區和波長(cháng)范圍為200～400 nm的紫外光區.不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.
鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長(cháng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍靛,紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計的光源.
光度定義
分光光度法是在特定波長(cháng)處或一定波長(cháng)范圍內光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的...
分光光度計
分光光度計，又稱(chēng)光譜儀(spectrometer)，是將成分復雜的光，分解為光譜線(xiàn)的科學(xué)儀器。測量范圍一般包括波長(cháng)范圍為400~760 nm的可見(jiàn)光區和波長(cháng)范圍為200～400 nm的紫外光區.不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長(cháng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍靛,紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計的光源.
光度定義
分光光度法是在特定波長(cháng)處或一定波長(cháng)范圍內光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的波長(cháng)范圍為：(1)200～400nm的紫外光區，(2)400～760nm的可見(jiàn)光區，(3)2.5～25μm（按波數計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見(jiàn)光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定，定期進(jìn)行校正檢定。
儀器組成
分光光度計已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸，蛋白
定量以及**生長(cháng)濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。
光譜范圍
包括波長(cháng)范圍為400~760 nm的可見(jiàn)光區和波長(cháng)范圍為200～400 nm的紫外光區.不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.
鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長(cháng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍靛,紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計的光源.
氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長(cháng)的光譜可作為紫外光光度計的光源.
物質(zhì)的吸收光譜(1)
如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現了幾條暗線(xiàn),即光源發(fā)射光譜中某些波長(cháng)的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱(chēng)為該溶液的吸收光譜.
不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).
物質(zhì)的吸收光譜(2)
當光線(xiàn)通過(guò)某種物質(zhì)的溶液時(shí)透過(guò)的光的強度減弱.因為有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過(guò)溶液.
入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過(guò)光
如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失則:
入射光 = 吸收光 十 透過(guò)光
原理
分光光度計采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源，光線(xiàn)透過(guò)測試的樣品后，部分光線(xiàn)被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過(guò)被測物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(cháng)度）成正比，其關(guān)系如下式：
A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度；
基本原理
I。為入射的單色光強度；
I 為透射的單色光強度；
T 為物質(zhì)的透射率；
k 為摩爾吸收系數；
L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長(cháng)
c 為物質(zhì)的濃度
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長(cháng)，以及相應的吸收系數是該物質(zhì)的物理常數。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時(shí)應用標準品或對照品同時(shí)操作。
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